人类新型冠状病毒NL63木瓜样蛋白酶生物学功能研究1.pdf

人类新型冠状病毒NL63木瓜样蛋白酶生物学功能研究
作者 : 刘殿波
学位授予单位 : 内蒙古农业大学
学位名称 : 硕士
外文题名 : Biological Functions of Papain-Like Protease of Human Coronavirus NL63
导师姓名 : 张七斤;陈忠斌
学位年度 : 2010
关键词 : 人类新型冠状病毒；NL63木瓜样蛋白酶；泛素；去泛素化酶；干扰素
摘要 : 本研究以人类新型冠状病毒NL63 (human coronavirus NL63, HCoV-NL63)木瓜样蛋白酶(papain-like protease, PLP)为研究对象,首先构建了木瓜样蛋白酶1 (papain-like protease 1, PLP1)的突变体D1225A和木瓜样蛋白酶2 (papain-like protease 2, PLP2)的突变体D1849A表达载体。通过Western Blotting技术证实,PLP1及其突变体C1062A、H1212A、D1225A对泛素(ubiquitin, Ub)分子不具有去泛素化(deubiquitinase, DUB)活性,PLP2却明显不同,野生型PLP2及突变体D1849A具有较强的DUB活性,而突变体C1678A、H1836A则丧失了此活性,同时对泛素样分子——干扰素刺激基因15(interferon stimulate gene 15, ISG15)进行检测,得到了相同的结论,提示PLP2的第1678位半胱氨酸和第1836位组氨酸是其DUB活性所必需的位点,第1849位天冬氨酸属于非必需位点。 HCoV-…