某猪场爆发猪瘟的诊断及其病毒E2基因表达载体的构建

某猪场爆发猪瘟的诊断及其病毒E2基因表达载体的构建
作者 : 梁仕岩
学位授予单位 : 贵州大学
学位名称 : 硕士
外文题名 : Diagnosis on the Classical Swine Ferver Outbreak in One Pig Farm and Construction of Expression Vector for E2 Gene of Classical Swine Fever Virus
导师姓名 : 汤德元;郁建生
学位年度 : 2009
关键词 : 猪瘟的诊断；E2基因克隆；序列分析；表达载体构建
摘要 : 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种高度接触性传染病,以发热和出血为主要特征。世界动物卫生织(OIE)将其列为16种A类传染病之一,我国亦将之列为一类动物传染病。目前,CSF主要分布在亚洲、非洲、南美洲和欧洲的40多个国家和地区。调查显示,现阶段CSF仍是对全球养猪业威胁最大的疾病,我国是猪瘟流行较严重的国家,我省各地也时常有猪瘟发生,每年因猪瘟死亡的猪占饲养总数的3%～5%,造成巨大的经济损失,因此对猪瘟的快速诊断和防制仍然具有十分重要的意义。 2007年6月贵州铜仁某猪场爆发了疑似猪瘟的疫情,通过流行病学调查、临床症状观察、病理剖检变化、金标卡检测、兔体交互试验及RT-PCR实验诊断后确诊为猪瘟。然后根据GenBank登录的猪瘟病毒shimen, C株的E2基因序列设计一对特异引物,采摘病死猪的血液、扁桃体、淋巴结、脾、肾等组织提取总RNA,并进行RT-PCR扩增,通过电泳检测和测序后获得预期目的DNA条带,并将其纯化后与pMD18-T载体连接、转化到TOP10感受细胞中,在含Amp的琼脂培养基中加入IPTG和X-gal诱导培养,挑选白色菌落培养抽…