CX3CR1对人肝细胞癌及其肿瘤微环境的影响

CX3CR1对人肝细胞癌及其肿瘤微环境的影响
作 者 : 范梦恬
学位授予单位 : 重庆医科大学
学位名称 : 硕士
导师姓名 : 施琼
学位年度 : 2017
关键词 : 肿瘤；肝癌细胞；CX3CR1；巨噬细胞；极化
摘 要 : 目的:探索趋化因子受体CX3CR1对人肝细胞癌,以及通过调节巨噬细胞极化对肿瘤微环境的影响及其机制。方法:在体外实验中,用50ng/ml氟波脂(PMA)将人单核细胞THP-1诱导成巨噬细胞(M0),并用干扰RNA干扰M0细胞中的CX3CR1,然后通过RT-PCR的方法检测CX3CR1的表达水平。处理后的巨噬细胞表型通过RT-PCR检测M1和M2相关标记来确定,然后分别收集巨噬细胞M0和干扰CX3CR1后巨噬细胞的条件培养基,并将条件培养基加入到Hep G2和7721细胞中,通过流式、MTT、划痕、Transwell等试验方法观察肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学效应的改变,同时用过表达质粒和干扰RNA,过表达7721细胞中的CX3CR1、抑制HepG2细胞中的CX3CR1的表达,通过MTT、流式、划痕、Transwell等方法检测肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭等改变,最后通过Western blotting的方法检测肿瘤细胞中PI3K-AKT和ERK-MAPK相关信号通路的变化,初步探究CX3CR1发挥调节作用的机制。结果:在用干扰RNA处理诱导成功的巨噬细胞后,巨噬细胞中的CX3CR1的水平受到了明显的抑制,检测巨噬细胞相关指标发现M1型巨噬细胞相关标记升高,M2型相关标记下降,将收集的条件培养基加入Hep G2和7721细胞中观察到,HepG2和7721细胞的增殖、迁移、侵袭能力受到明显抑制,凋亡增加,过表达CX3CR1促进了7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰CX3CR1抑制了HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能了。结论:抑制了CX3CR1的表达后,可促进巨噬细胞向M1型极化,并且抑制了HepG2和7721细胞的增殖、迁移、侵袭,促进了肿瘤细胞的凋亡,过表达CX3CR1促进了7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰CX3CR1抑制了HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能了。

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